高三生物如何掌握这些重要实验？

　　实验一：观察DNA和RNA在细胞中的分布

　　1.实验原理：利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布；甲基绿和吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同：甲基绿+DNA→绿色

　　吡罗红+RNA→红色

　　2.分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中；

　　线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。

　　3.实验结果：细胞核呈绿色，细胞质呈红色.

　　4.实验结论：DNA主要分布在细胞核中；RNA主要分布在细胞质中；

　　5.实验流程：

　　(1)取口腔上皮细胞制片：①载玻片上滴一滴质量分数为：0.9%NaCl溶液；

　　②漱口后，用消毒牙签刮口腔内壁后放在载玻片的液滴中涂抹几下；③载玻片在酒精灯上烘干，盖上；

　　(2)水解：①载玻片放入盛有30ml质量分数为8%的HCl的小烧杯中；②大烧杯中加入30℃温水；

　　③将小烧杯放入大烧杯中保温5min；

　　(3)冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s；

　　(4)染色：①吸水纸吸去载玻片的水分；②滴两滴混合染液，染色5min；③吸去多余的染液，盖上盖玻片；

　　(5)观察：先低倍后高倍；

　　6、几种液体在实验中的作用：

　　(1)0.9%NaCl溶液：保持口腔上皮的正常形态。

　　8%的HCl：①改变细胞膜等的通透性；②使染色质中的DNA与蛋白质分开。蒸馏水：配置染液；冲洗载玻片。

　　(2)混合染液需要现配现用；

　　(3)该实验不宜用深色的材料，避免颜色对实验的干扰。

　　实验二：物质鉴定

　　一、实验原理：还原糖+斐林试剂～砖红色沉淀(水浴加热)

　　脂肪+苏丹III～橘黄色(滴液观察或制片显微镜观察)

　　脂肪+苏丹IV～红色

　　蛋白质+双缩脲试剂～紫色反应(不加热)

　　1、还原糖的检测

　　(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如：苹果，梨，白萝卜。

　　(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，现配现用。

　　(3)步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴

　　加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)

　　实验三：观察叶绿体和细胞质流动

　　1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

　　2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色，球形或椭球形。

　　用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色，细胞质接近无色。

　　知识概要：取材、制片、低倍观察、高倍观察

　　实验四：观察有丝分裂

　　1、材料：洋葱根尖(葱，蒜)

　　2、步骤：(一)洋葱根尖的培养

　　(二)装片的制作

　　3、实验原理：

　　(1)龙胆紫溶液能将染色体染成深色

　　(2)有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同，可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况，识别该细胞处于那个时期。

　　制作流程：解离→漂洗→染色→制片

　　1.解离：药液：质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精(1：1混合液).时间：3~5min.目的：使组织中的细胞相互分离开来.

　　2.漂洗：用清水漂洗约10min.目的：洗去药液，防止解离过度，并有利于染色.

　　3.染色：用质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~5min

　　目的：使染色体着色，利于观察.

　　4.制片：将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片.然后用拇指轻轻地按压载玻片.

　　目的：使细胞分散开来，有利于观察.

　　(三)观察

　　1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。(长方形：伸长区)

　　2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点)。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

　　实验五：色素的提取和分离

　　1、原理：(1)叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素(2)各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素

　　2、步骤：

　　提取色素

　　(1)称取5g绿色叶片并剪碎提取色素

　　(2)加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮

　　(研钵→研磨→漏斗过滤→，收集到试管内并塞紧管口)

　　制滤纸条

　　(1)将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角(使层析液同时到达滤液细线)

　　(2)在距剪角一端1cm处用铅笔画线

　　滤液划线

　　(1)用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线

　　(2)干燥后重复划2-3次

　　纸上层析

　　(1)向烧杯中倒入3ml层析液(以层析液不没及滤液细线为准)

　　(2)将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中

　　(3)用培养皿盖盖上烧杯

　　观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带。