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高考生物复习:胡萝卜的组织培养

来源:网络资源 2019-05-14 16:24:22

  一、实验目的:

  胡萝卜是细胞和组织培养中常用的经典材料,是教学实验的良好材料。通过本实验实训,要求学生熟悉胡萝卜离体根培养的基本方法和步骤,掌握愈伤组织诱导的基本技能。

  二、实验原理:

  植物体的茎,根,叶细胞一般都具有全能性,在一定条件的营养和激素等条件下,

  可以脱分化形成愈伤组织。将愈伤组织转 接到含有不同激素成分的培养基上,就可以诱导其再分化生成胚状体或丛芽,进而发育成完整的小植株。植物组织培养的全过程,证明了分化的植物细胞,仍具有形成完整植株所需要的全部基因。

  三、实验用具:超净台 解剖刀 刮皮刀 不锈钢打孔器 培养皿 温箱

  四、方法步骤:

  1. 将胡萝卜用自来水冲洗干净,用刮皮刀除去表皮1-2mm,横切成大约10mm厚的切片。以下步骤均在无菌条件下进行。

  2. 胡萝卜片经70%乙醇处理30秒钟后,用无菌水冲洗一遍,再用、2%的次氯酸钠溶液浸泡10分钟,无菌水冲洗3~4次。

  3. 将胡萝卜片放入培养皿中,一手用镊子固定胡萝卜片,一手用打孔器垂直打孔,每个小孔打在靠近维管形成层的区域,务必打穿组织。然后从组织片中抽出打孔器,将胡萝卜组织片收集在装有无菌水的培养皿。重复打孔步骤,直至收集到足够数量的组织圆片。

  4. 用镊子取出组织圆片,放入培养皿中,用刀片将组织圆片切成2mm长的小块,放入装有无菌水的培养皿中。在整个操作过程中镊子和解剖刀要多次火焰消毒,冷却后再使用。

  5、将胡萝卜组织小块放到灭过菌的滤纸上,吸干水分后接种到培养基表面。注意接种时培养瓶要有一定倾斜度,接种过程中镊子不要直接在培养基上方完成,以减少污染机会。

  6、将培养物一部分置于25。C温箱中暗培养,另一部分到光照培养室中进行培养,以比较光照和暗培养对愈伤组织诱导的反应。

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